Diana Frances Spencer gimė liepos 1 d. Parkhauze netoli Sandringemo, Norfolke, Anglijoje, kilmingoje šeimoje. Ji buvo trečioji trisdešimt septynerių metų vikonto Oltorpo ir dvidešimt penkerių metų vikontės Oltorp šeimos duktė. Diana turėjo dvi vyresnes seseris: Sarą ir Džeinę, bei jaunesnįjį brolį Charlesą. Šeima neslėpė nusivylimo jos gimimu, nes labai tikėjosi vyriškos lyties įpėdinio, turėjusio pratęsti Spenserių giminę. Naujagimę pavadino Diana Frances – motinos ir vienos Spenserių prosenelės garbei.
1977 m. lapkričio mėnesį Diana susipažino su Jo Karališkąja Didenybe Velso Princu Charlesu, kuris anksčiau devynis mėnesius draugavo su Dianos seserimi Sara.
1977–1978 m. baigusi Vesthito mokyklą, Diana vieną semestrą mokosi aukštesnio lygio Alpin Videmanette, Šveicarijoje mokykloje. 1979 m. Diana gyveno Londone ir dirba privačių pokylių padavėja bei padiene darbininke.
1980 m. atsinaujino Dianos kontaktai su Karališkąja šeima ir Princu Čarlsu. Spenseriai lankosi Vindsoro pilyje, Balmorale (Balmoral Castle). 1981 m. vasario mėnesį, Vindzoro pilyje Velso Princas Čarlsas oficialiai paprašė ledi Dianą Spenser tapti jo žmona. Sužadėtuvės buvo viešai paskelbtos vasario 24 dieną. Liepos 29 d. Dianą ištekėjo už Velso Princo Čarlso. Šį momentą prie televizorių ekranų stebėjo 750 milijonų žmonių daugiau nei septyniasdešimtyje šalių. Spalio mėnesį Diana išvyko į savo pirmąjį oficialų trijų dienų vizitą Velse.
1982 m. birželio 21 d. Dianai gimė sosto įpėdinis Princas Williamas.
1984 m. rugsėjo 15 d. Dianai gimė antrasis sūnus Princas Harry.
1992 m. vasarą, kai visuomenės dėmesys jos ir Princo santuokai buvo itin intensyvus, Diana pradėjo lankyti ligonines. Ji taip pat lankėsi skriaudžiamų moterų ir benamių žmonių prieglaudose, dalyvaudavo labdaros renginiuose Kensingtono rūmuose ar kitur.
1993 m. gruodžio 3 dieną, per oficialius labdaringus pusryčius, skirtus Hedvėjaus valstybinei galvos traumų asociacijai, Princesė paskelbė pasitraukianti iš visuomeninio gyvenimo.
1994 m. birželio 29 d. televizijos interviu metu, Princas Čarlsas pripažįsta savo ryšius su meiluže Kamila Parker-Bouls ir tai, kad jis buvo neištikimas savo žmonai Dianai.
1996 m. rugpjūčio 28 d. Čarlso ir Dianos santuoka baigė galioti. Princesė laimėjo dėl jos kanceliarijos Šv. Jokūbo rūmuose ir vienkartinės 17 mln. svarų išmokos, bet iš jos buvo atimtas garbės titulas. Išsiskyrusi, Diana pasirinko penkias labdaros sritis – Raupsuotųjų misiją, labdarą benamiams, Valstybinę sergančiųjų AIDS globą, Karališkąją Marsdeno onkologijos ligoninę ir Greit Ormond Strito vaikų ligoninę.
1997 m. rugpjūčio 8 d. Diana aplanko karo nuniokotą kraštą – Bosniją. Kai kurie Britanijos politikai ją kritikavo, bet šis apsilankymas pas karo aukas sukėlė didelį atgarsį pasaulyje. Tai buvo paskutinis jos vizitas.
1997 m. rugpjūčio 30 d. vakarą Diana ir jos draugas Dodis Al Fajedas atvyksta į „Ritz“ viešbutį Paryžiuje pavakarieniauti. Po vidurnakčio pora išėjo iš viešbučio ir išvažiavo automobiliu, kurį vairavo asmeninis vairuotojas. Tačiau požeminiame kelyje po Almos aikšte, netoli Eifelio bokšto, vairuotojas nesuvaldė automobilio ir šis trenkėsi į betoninę pertvarą, skiriančią važiavimo juostas. Vairuotojas ir Dodis Al Fajedas žuvo iškart, asmens sargybinis buvo sunkiai sužeistas, o mirtinai sužeista Princesė buvo be sąmonės. Gelbėjimo grupei prireikė beveik valandos, kad Princesė būtų ištraukta iš sulankstyto automobilio nuolaužų ir tada nugabenta į artimiausią La Pitie-Salpetriere ligoninę bei skubiai operuota. Ketvirtą valandą ryto vietos laiku gydytojai pranešė, kad Diana mirusi.
Diana palaidota Oltorpe, Raund Ovalo saloje.
